谭宇蕙 吴映雅 王慧峰 岳文玲 钟富有（广州中医大学生化教研室 广州 5150405） 纯中药复方消癌根由化州市丽岗肿瘤医院民间中医师董草原先生提供。据有关报道该方对肝癌有较好的临床疗效。本研究组根据血清药理学实验的原理和方法，对复方消癌根含药血清体外抑瘤的药理活性进行了初步的实验研究。 1． 实验材料 小鼠肝癌细胞株H22购自中山大学实验动物中心，细胞培养基RPMI1640为GIBCO公司产品，噻唑蓝（MTT）、二甲亚砜（DMSO）等试剂为Sigma公司产品。新生牛血清为杭州四季青公司产品。纯中药复方消癌根药粉及其配药液均由化州市中医师董草原提供。 2． 方法 2．1受试药制备：把用于溶解药粉的附配中药液煮沸浓缩3倍，同时把消癌根药粉用80目筛网过筛。临用前把消癌根药粉混合在上述浓缩的附配药液中。 2．2 含药血清制备方法：取2只体重约400g的SD大鼠，眼眶取血各4mL，开盖置室温空气中放置15-30分钟，离心取血清作为空白对照血清。次日开始灌中药。根据大鼠与人的体表面积比例，按人每kg体重的临床日用量折算大鼠的等效剂量，大鼠每kg体重用药量应为人的6-8倍，本实验按8倍计算。因此每日需灌服大鼠1.33g/kg消癌根药品，混合在5mL浓缩3倍的附配药液中，连续灌胃6天。第6天灌药4小时后眼眶取血各4mL,同前法制备含药血清。 2．3 血清药理学实验：小鼠肝癌细胞株H22用完全培养液（含RPMI1640培养基、10%小牛血清、1×105IU/L青霉素及125mg/L链霉素在37℃、5%CO2中培养数天后传代，按每孔约5000个细胞分装在96孔板上继续培养，分为5组：（1）对照血清组A；（2）25%含药血清组；（3）对照血清组B；（4）50%含药血清组（前两组与后两组在不同时间传代。每次传代设一血清对照组，故有两个血清对照组）。用RPMI1640完全培养基补足体积至每孔150微升，每组3个复孔。培养24小时后分别加入相应浓度的含药血清和对应的对照血清。继续培养3天。检测指标：苔盼蓝计数法和MTT法测定细胞生相隔率，光镜下观察细胞形态、拍照。 3．结果 用苔盼蓝计数法对各组细胞进行计数，结果见表1。光镜下可见空白组和对照血清组的肝癌细胞形态较圆、细胞膜比较完整光滑，含药血清组的细胞形态较为不规则，膜表面不平整，出现皱缩，胞浆内容物外泄，随着含药浓度的增加，圆形细胞密度数目不断减少，不规则及碎裂的细胞数目不断增加，细胞生长总体密度不断下降。 表1不同浓度含药血精对H22细胞生长抑制的影响（x±s.n=3） 组别 空白组 不含药对照血清组A 25%含药血清组 不含药对照血清组B 50%含药血清组 细胞计数（×104个/mL） 63,70 74,71, 83,80 73,75 51,46,68,66; 58.50,47,56; 48,49,56,57 50,41,46,53; 38,49,48,45; 37,49,49,36 22,40,29,39; 32,30,31,23; 24,20,30,24 24,22,16,22; 17,21,17,20; 16,21,16,19 细胞数目平均值 73．6 ±7.2 54.2 ±7.1 45.9 ±7.1a 28.7 ±6.4 19.3 ±2.8b 存活率（%） 100±13.1 83.2±10.5a 100±22.3 67.2±9.8v 杀伤率（%） 0 16．8 0 32．8 Vs对照组，ap＜0.05;bp＜0.01 4.讨论 低浓度含药血清对癌细胞的杀伤率为16.8%，高浓度含药血清对癌细胞的杀伤率为32.8%；总的来说，本次实验所用中药的浓度较临床实际用药量低，原因是供药者所供中药原料粉碎度低，颗粒粗糙，而且该药不能煮沸浓缩，造成动物灌胃困难；另外，细胞水平实验中给药培养只有三天，而且三天共给药一次，这些可能是对癌细胞杀伤率不够高的原因。尽管杀伤率不算很高，但细胞形态学检测中我们观察到，存留下来的细胞大部分已处于或趋向凋亡，含药血清组与对照血清组相比有明显不同的形态。 |
